1. Clasificare
Electroforeza pe gel este împărțită în tipuri verticale (inclusiv geluri de coloană și geluri de plăci) și tipuri orizontale (în principal geluri de plăci) (Figura 6-18). În general, separarea verticală este puțin superioară față de orizontală, dar prepararea gelului pe orizontală are cel puțin patru avantaje: există suport sub întregul gel, permițând utilizarea agarozei cu concentrație scăzută; este posibil să se pregătească plăci de gel de agaroză cu specificații diferite; prepararea gelului și încărcarea probelor sunt mai convenabile; camera de electroforeză este ușor de construit și rentabilă. Deoarece electroforeza orizontală este efectuată cu placa de gel de agaroză complet scufundată la aproximativ 1 mm sub suprafața tamponului de electroforeză, se mai numește și electroforeză scufundată.
Rezervor de electroforeză DYCP-31DN pentru electroforeză pe gel de agaroză
2.Sistem tampon
În separarea acidului nucleic, majoritatea sistemelor adoptă sisteme continue. Tamponele de electroforeză utilizate în mod obișnuit includ tampon TBE (0,08 mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L acid boric, 0,0024mol/L EDTA) și THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L). acetat de sodiu, tampon EDTA 0,0018mol/L). Aceste soluții tampon sunt în general preparate ca soluții stoc de 10x și diluate la concentrația necesară atunci când sunt utilizate. Ratele de migrare ale ADN-ului liniar și circular în gel de agaroză variază în funcție de tamponul utilizat. În tamponul THE, rata de migrare a ADN-ului liniar este mai mare decât cea a ADN-ului circular, în timp ce în tamponul TBE, opusul este adevărat.
3.Pregătirea gelului de agaroză
(1) Prepararea gelului de agaroză orizontală
(a) Pregătiți concentrația necesară de gel de agaroză folosind tampon de electroforeză 1x.
(b) Se încălzește agaroza până la dizolvarea completă, fie într-o baie de apă clocotită, pe un agitator magnetic, fie într-un cuptor cu microunde. Se răcește soluția de agaroză la 55°C și se adaugă colorant cu bromură de etidio (EB) la o concentrație finală de 0,5 μg/ml.
(c) Sigilați marginile plăcilor de sticlă sau acrilice cu o cantitate mică de gel de agaroză, adăugați un pieptene și poziționați dinții pieptenilor la aproximativ 0,5 ~ 1,0 mm deasupra plăcii.
(d) Se toarnă soluția de gel de agaroză topită în mod continuu în matrița din sticlă sau plăci acrilice (grosimea depinde de volumul probei de ADN), evitând introducerea bulelor de aer. Lăsați să se solidifice natural la temperatura camerei.
(e) Scoateți cu grijă pieptene după solidificarea completă. Adăugați o cantitate adecvată de tampon de electroforeză în rezervorul de gel, asigurându-vă că placa de gel este scufundată la aproximativ 1 mm sub suprafața tamponului de electroforeză.
(2) Prepararea gelului de agaroză verticală
(a) Îndepărtați grăsimea sau reziduurile de pe plăcile de sticlă prin spălare cu etanol.
(b) Așezați plăci distanțiere între barajele din față și din spate, aliniați marginile plăcilor de distanță cu barajele din față și din spate și fixați-le cu cleme.
(c) Adăugați 2% agaroză în tampon 1x între marginile plăcilor distanțiere pentru a forma un dop de agaroză înalt de 1 cm în partea de jos a camerei de turnare a gelului.
(d) Se toarnă gelul de agaroză topit la concentrația dorită, preparat în tampon 1x, în camera de gel până la 1 cm sub partea de sus.
(e) Introduceți pieptenele, evitând blocarea bulelor de aer sub dinții pieptenelor. Uneori, pot apărea riduri la dinții pieptenelor în timpul răcirii gelului de agaroză; în astfel de cazuri, adăugați pur și simplu niște agaroză topită în partea de sus pentru a o solidifica.
(f) Scoateți pieptene. Pentru a preveni scurgerea tamponului în fanta de încărcare, etanșați conexiunea dintre placa de gel de agaroză și camera de electroforeză cu agaroză 2% și adăugați cantitatea necesară de tampon.
(g) Adăugați 1x tampon de electroforeză în camera de gel.
(h) Încărcați cu atenție probele de ADN pe gelul de agaroză de sub tampon.
Mai multe informații despre cunoștințele de bază despre electroforeza pe gel de agaroză, le vom împărtăși săptămâna viitoare. Doriți ca aceste informații să fie utile pentru experimentul dvs.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) s-a specializat în producția de instrumente de electroforeză de mai bine de 50 de ani, cu propria noastră echipă tehnică profesionistă și centru de cercetare și dezvoltare. Avem o linie de producție fiabilă și completă, de la proiectare la inspecție și depozit, precum și suport de marketing. Produsele noastre principale sunt celula de electroforeză (rezervor/camera), sursa de alimentare cu electroforeză, transiluminator cu LED albastru, transiluminator UV, sistem de analiză și imagine cu gel etc.
Acum căutăm parteneri, atât rezervorul de electroforeză OEM, cât și distribuitorii sunt bineveniți.
Dacă aveți vreun plan de achiziție pentru produsele noastre, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați. Ne puteți trimite mesaj pe e-mail[email protected]sau[email protected], sau vă rugăm să ne sunați la +86 15810650221 sau adăugați Whatsapp +86 15810650221 sau Wechat: 15810650221.
Vă rugăm să scanați codul QR pentru a-l adăuga pe Whatsapp sau WeChat.
Ora postării: Dec-07-2023