Electroforeza pe gel este una dintre metodele majore utilizate în biologia moleculară pentru analiza ADN-ului. Această metodă implică migrarea fragmentelor de ADN printr-un gel, unde sunt separate în funcție de dimensiune sau formă. Cu toate acestea, ați întâmpinat vreodată erori în timpul experimentelor de electroforeză, cum ar fi benzi pe gelul de agaroză sau fără benzi pe gel? Care ar putea fi cauza acestor erori?
Tehnicienii noștri au rezumat câteva depanări aici pentru referință.
1. Benzi unse pe gel de agaroză
●ADN-ul a fost degradat. Evitați contaminarea cu nuclează.
● Tamponul de electroforeză nu este proaspăt. După utilizarea repetată a tamponului de electroforeză, puterea ionică scade, iar valoarea pH-ului acestuia crește, astfel încât capacitatea tamponului scade, ceea ce afectează efectul de electroforeză. Se recomandă înlocuirea frecventă a tamponului de electroforeză.
● S-au folosit condiții necorespunzătoare de electroforeză. Nu permiteți ca tensiunea să depășească 20 V/cm și mențineți o temperatură <30°C în timpul electroforezei. Pentru electroforeza catenei gigantice de ADN, temperatura ar trebui să fie <15° C. Verificați că tamponul de electroforeză are suficientă capacitate de tampon.
● S-a încărcat prea mult ADN pe gel. Reduceți cantitatea de ADN.
● Prea multă sare în ADN. Utilizați precipitarea cu etanol pentru a elimina excesul de săruri în avans.
● ADN-ul a fost contaminat cu proteine. Utilizați extractii cu fenol pentru a elimina proteinele în avans.
● ADN-ul a fost denaturat. Nu încălziți înainte de electroforeză. Se diluează ADN-ul în tampon cu 20 mM NaCI.
2. Anomalii migrarea benzii ADN
● Renaturarea situsului COS al fragmentului λHind III. Se încălzește ADN-ul timp de 5 minute la 65 ° C înainte de electroforeză, apoi se răcește pe unitatea de gheață timp de 5 minute.
● S-au folosit condiții necorespunzătoare de electroforeză. Nu permiteți ca tensiunea să depășească 20 V/cm și mențineți o temperatură <30°C în timpul electroforezei. Verificați că tamponul de electroforeză are suficientă capacitate tampon.
● ADN-ul a fost denaturat. Nu încălziți înainte de electroforeză. Se diluează ADN-ul în tampon cu 20 mM NaCI.
3. Benzi de ADN slabe sau lipsite pe gel de agaroză
● A existat o cantitate sau o concentrație insuficientă de ADN încărcat pe gel. Creșteți cantitatea de ADN. Electroforeza pe gel de poliacrilamidă este puțin mai sensibilă decât electroforeza cu agaroză, iar încărcarea probei poate fi redusă în mod corespunzător.
● ADN-ul a fost degradat. Evitați contaminarea cu nuclează.
● ADN-ul a fost electroforezat de pe gel. Electroforezează gelul pentru mai puțin timp, folosește o tensiune mai mică sau folosește un gel procent mai mare.
● Sursa de lumină W necorespunzătoare a fost utilizată pentru vizualizarea ADN-ului colorat cu bromură de etidio. Utilizați o lumină cu lungime de undă scurtă (254 nm) W pentru o mai mare sensibilitate.
4. Benzile de ADN lipsesc
●ADN-ul de dimensiuni mici a fost electroforezat de pe gel. Electroforezează gelul pentru mai puțin timp, folosește o tensiune mai mică sau folosește un gel procent mai mare.
● Este dificil de distins benzile de ADN de moleculare similare. Măriți timpul de electroforeză și verificați concentrațiaa gelului pentru a vă asigura că gelul trebuie utilizat corect.
● ADN-ul a fost denaturat. Nu încălziți înainte de electroforeză. Se diluează ADN-ul în tampon cu 20 mM NaCI.
● Catenele de ADN sunt uriașe, iar electroforeza convențională pe gel nu este potrivită. Analizați pe electroforeză pe gel puls.Ce alte probleme ați avut cu electroforeza pe gel de agaroză? Vom căuta mai multe ghiduri în viitor.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) este o companie specializată care se concentrează pe produse legate de electroforeză în China. Povestea sa începe în 1970, când China nu intrase încă în timpul reformei și deschiderii. De-a lungul anilor de dezvoltare, Liuyi Bitotech are propria sa marcă, care este cunoscută ca marca Liuyi pe piața internă pentru produse de electroforeză.
Marca Liuyi are o istorie de peste 50 de ani în China, iar compania poate oferi produse stabile și de înaltă calitate în întreaga lume. De-a lungul anilor de dezvoltare, este demn de alegerea ta!
Celulele de electroforeză orizontale (rezervoare/camere) ale Liuyi Biotech sunt de înaltă calitate, cu aspect bun. Cu diferite dimensiuni de tăvi cu gel, acestea pot satisface diferitele cerințe experimentale. Avem propria noastră echipă tehnică și fabrică. De la proiectare la fabricare, de la materii prime la piesele cheie, putem controla întregul proces. Seria DYCP 31 este pentru electroforeza ADN, care sunt modelDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, șiDYCP-31E. Diferențele dintre ele sunt dimensiunile gelului și prețul. Oferim produse de dimensiuni complete pentru clienții noștri. ModelulDYCP-32Cpoate face cel mai mare gel de 250 mm * 250 mm.
Între timp, vă recomandăm sursa noastră de alimentare pentru electroforezăDYY-6C,DYY-6DşiDYY-10Cpentru celulele noastre de electroforeză (rezervoare/camere) seriile DYCP-31 și 32.
Dacă doriți mai multe informații despre produse, vă rugăm să vizitați acest site web pentru a obține mai multe și bine ați venit să ne contactați prin e-mail pentru a ne spune ce doriți și a vedea dacă vă putem oferi soluțiile.
Pentru mai multe informații despre noi, vă rugăm să ne contactați pe e-mail[email protected], [email protected].
Ora postării: mai-09-2022