Principiu
Electroforeza filmului de acetat de celuloză este o metodă de electroforeză care utilizează un film de acetat de celuloză ca suport. Fenomenul în care particulele încărcate se deplasează spre electrodul opus sub acțiunea câmpului electric se numește electroforeză. Deoarece fiecare proteină are un punct izoelectric specific, dacă o proteină este plasată într-o soluție cu un pH mai mic decât punctul său izoelectric, proteina va fi încărcată pozitiv și se va deplasa către electrodul negativ. Dimpotrivă, se deplasează la polul pozitiv. Deoarece viteza de mișcare a moleculelor de proteine într-un câmp electric este legată de sarcina lor, de forma și dimensiunea moleculelor, diferite proteine pot fi separate prin electroforeză. Serul conține o varietate de proteine, toate având puncte izoelectrice la pH 7,5 sau mai puțin. Când serul este plasat în tampon cu pH 8,6 pentru a efectua electroforeza, toate proteinele serice sunt încărcate negativ și se vor deplasa spre partea pozitivă în câmpul electric. Deoarece diferite proteine serice au sarcini diferite la același pH, particulele moleculare au dimensiuni diferite și, prin urmare, viteza de migrare este diferită și sunt separate prin electroforeză. Punctele izoelectrice și greutățile moleculare ale proteinelor serice sunt prezentate în tabelul de mai jos:
| Proteină | Puncte izoelectrice (PI) | Greutate moleculară |
| Albumină | 4,88 | 69 000 |
| α1-gloulină | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulină | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulină | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-gloulină | 6,85~7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
Experimentul constă în separarea diferitelor proteine în serul sanguin cu membrană de acetat de celuloză (abreviat CAM) ca mediu suport. CAM este un fel de spumăefilm cu uniformă bună, iar grosimea este de 0,1 mm-1,5 mm, care are o anumită absorbție de apă.
Materiale, instrumente și reactivi pentru electroforeza CAM
Mostre:ser de sânge uman sănătos
Instrument:sursă de alimentare DYY-6C, rezervor de electroforeză DYCP-38C, încărcare superioară a probei WD-9404
Reactivii
1) membrana acetat de celuloza 7X9cm
2) Soluție tampon PH 8,6 barbitol (tărie ionică 0,05-0,09, este 0,06tid timp.): luați 1,84 g acid dietil barbituric, apoi luați 1,03 g dietil pentobarbital sodiu, adăugați apă distilată pentru a se dizolva și faceți până la 1000 ml;
3) Pata: Ponceau S 0,2g, Tricloroacetic 3g, se adaugă 100ml apă distilată;
4) TBS/T sau PBS/T: 45ml etanol 95%, 5ml acid acetic glacial, adăugați 50ml apă distilată;
5) Soluție de curățare: 70 ml etanol anhidru, 30 ml acid acetic glacial.
Experimentați Method
1) Pregătiți membrana: scufundați membrana în soluția tampon de barbitol 30min-8h și scoateți-o, îndepărtați soluția suplimentară cu hârtie absorbantă.
2) Încărcarea probelor: Distingeți partea aspră și partea netedă a membranei și marcați o linie la o distanță de 1,5 cm până la capătul de sus pe partea aspră. Încărcați mostre cu un instrument superior de încărcare a probei pe partea aspră. Notă: Probele trebuie încărcate pe partea aspră a membranei. După ce probele de ser sunt pătrunse complet în membrană, întoarceți membrana, puneți partea aspră (cu probe) cu fața în jos în rezervor, iar capătul cu probe este plasat în electrodul negativ.
3) Electroforeză: Porniți sursa de alimentare, 0,4～Membrană de 0,6 m A/cm, timpul de funcționare este de 30-45 min. După efectuarea electroforezei, opriți alimentarea.
4) Pata si curata: Scoateti membrana din rezervor si scufundatiit în soluția de colorant timp de 5 minute, apoi curățați-l în soluția de curățare de 3-4 ori până când culoarea de fundal este limpede. Proteinele serice ar trebui să fie afișate pe benzi și, în mod normal, există cinci zone, formează capătul de sus până la linia marcată, albumină, α1-gloulină, α2-gloulină, β-gloulină, γ-gloulină.
5) Conservare: se pune electroforeza uscatăbandăîn soluție de curățare timp de 10-15 minute, apoi scoateți-l și lipiți-l pe un pahar curat, după ce se usucă, va deveni o peliculă transparentăbandă.
ExperimentRezultat
Efectul de separare al probelor de ser este bun și nu există nici un fenomen de coadă de bandă. Repetabilitatea rezultatelor variază din cauza procedurilor de testare și a metodelor experimentatorului, iar repetabilitatea este ridicată.
Concluzie
Sistemul rapid de detectare prin electroforeză clinică (Rezervor de electroforezăDYCP-38C,alimentare electricăDYY-6C și încărcarea eșantionului superioară WD-9404) produse de noastrecompania Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdîndeplinește cerințele experimentale,şirezultatele sunt reproductibile, simple și rapide, potrivite pentrupredarecercetare.
Beijing LiuyiBiotechnology Co., Ltd este specializată în fabricarea de produse de electroforeză pentru industria științelor vieții, careare o istorie de peste 50 de ani în China, iar compania poate oferi produse stabile și de înaltă calitate în întreaga lume. Prin ani de dezvoltare, este demn de alegerea ta!
Acum căutăm parteneri, atât rezervorul de electroforeză OEM, cât și distribuitorii sunt bineveniți.
Pentru mai multe informații despre noi, vă rugăm să ne contactați pe e-mail[email protected]sau[email protected].
Ora postării: 14-nov-2022