Introducere
Electroforeza pe gel este o tehnică fundamentală în biologia moleculară, utilizată pe scară largă pentru separarea proteinelor, acizilor nucleici și a altor macromolecule. Controlul adecvat al volumului probei, al tensiunii și al timpului de electroforeză este crucial pentru obținerea unor rezultate precise și reproductibile.Oferă colegul nostru de laboratorcele mai bune practici pentru gestionarea acestor parametri în timpul electroforezei pe gel SDS-PAGE.
Beijing Liuyi Biotehnologie gel electroforeză produse
Volumul eșantionului: asigurarea coerenței
Când efectuați electroforeza SDS-PAGE, volumul probei este un factor cheie care poate avea un impact semnificativ asupra rezoluției rezultatelor dvs. În general, se recomandă încărcarea a 10 µL de proteină totală pe godeu. Pentru a asigura consistența și a preveni difuzarea probei între godeurile adiacente, este important să încărcați un volum egal de tampon de încărcare 1x în orice godeu gol. Această precauție ajută la prevenirea răspândirii probelor în benzile învecinate, care poate apărea dacă puțul este lăsat gol.
Înainte de a vă încărca probele, începeți întotdeauna prin adăugarea unui marker de greutate moleculară într-un godeu. Acest lucru permite identificarea ușoară a dimensiunilor proteinelor după electroforeză.
Controlul tensiunii: echilibrarea vitezei și rezoluției
Tensiunea aplicată în timpul electroforezei afectează direct atât viteza cu care probele migrează prin gel, cât și rezoluția separării. Pentru SDS-PAGE, este indicat să începeți cu o tensiune joasă de aproximativ 80V. Această tensiune joasă inițială permite probelor să migreze lent și uniform, concentrându-le într-o bandă ascuțită pe măsură ce intră în gelul de separare.
Odată ce probele au intrat complet în gelul de separare, tensiunea poate fi crescută la 120V. Această tensiune mai mare accelerează migrarea, asigurând că proteinele sunt separate eficient în funcție de greutatea lor moleculară. Este esențial să se monitorizeze progresul frontului colorantului cu albastru de bromofenol, care indică finalizarea electroforezei. Pentru gelurile cu o concentrație de 10-12%, 80-90 de minute sunt de obicei suficiente; cu toate acestea, pentru geluri de 15%, poate fi necesar să prelungiți puțin timpul de rulare.
Managementul timpului: a ști când să te oprești
Timpul este un alt factor critic în electroforeza pe gel. Executarea gelului pentru o perioadă prea lungă sau prea scurtă poate duce la o separare suboptimă. Migrarea colorantului albastru de bromofenol este un indicator util: atunci când ajunge la fundul gelului, de obicei este timpul să opriți alergarea. Pentru gelurile standard, cum ar fi 10-12%, o durată de electroforeză de aproximativ 80-90 de minute este de obicei adecvată. Pentru geluri cu procente mai mari, cum ar fi 15%, timpul de rulare ar trebui extins pentru a asigura separarea completă a proteinelor.
Gestionarea tamponului: reutilizarea și pregătirea tamponurilor
Tamponul de electroforeză poate fi reutilizat de 1-2 ori, în funcție de condițiile specifice ale laboratorului dumneavoastră. Cu toate acestea, pentru rezultate optime, se recomandă să pregătiți tampon proaspăt de 10x și să-l diluați chiar înainte de utilizare. Acest lucru asigură că tamponul își menține eficiența, ceea ce duce la rezultate mai fiabile ale electroforezei.
Beijing Liuyi Biotehnologie gel electroforeză produse
Controlând cu atenție volumul probei, tensiunea și timpul de electroforeză, puteți îmbunătăți semnificativ acuratețea și reproductibilitatea rezultatelor electroforezei pe gel. Implementarea acestor bune practici în activitatea de laborator vă va ajuta să obțineți benzi mai clare și mai distincte, ceea ce duce la date mai bune pentru analiza în aval.
Dacă aveți mai multe metode bune pentru a optimiza experimentul de electroforeză pe gel, bine ați venit să discutați cu noi!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) s-a specializat în producția de instrumente de electroforeză de mai bine de 50 de ani, cu propria noastră echipă tehnică profesionistă și centru de cercetare și dezvoltare. Avem o linie de producție fiabilă și completă, de la proiectare la inspecție și depozit, precum și suport de marketing. Produsele noastre principale sunt celula de electroforeză (rezervor/camera), sursa de alimentare cu electroforeză, transiluminator cu LED albastru, transiluminator UV, sistem de analiză și imagine cu gel etc. De asemenea, furnizăm instrumente de laborator cum ar fi instrumentul PCR, mixerul vortex și centrifuga pentru laborator.
Dacă aveți vreun plan de achiziție pentru produsele noastre, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați. Ne puteți trimite mesaj pe e-mail[email protected]sau[email protected], sau vă rugăm să ne sunați la +86 15810650221 sau adăugați Whatsapp +86 15810650221 sau Wechat: 15810650221.
Vă rugăm să scanați codul QR pentru a-l adăuga pe Whatsapp sau WeChat.
Ora postării: 20-aug-2024