Am împărtășit câteva considerente săptămâna trecută pentru utilizarea electroforezei membranei cu acetat de celuloză și vom termina acest subiect astăzi pentru referință.
Selecția de Concentrația tampon
Concentrația tampon utilizată în electroforeza membranei cu acetat de celuloză este în general mai mică decât cea utilizată în electroforeza pe hârtie. pH-ul utilizat în mod obișnuit 8,6Btamponul arbital este de obicei ales în intervalul de la 0,05 mol/L până la 0,09 mol/L. La selectarea concentrației se face o determinare preliminară. De exemplu, dacă lungimea benzii membranei dintre electrozii din camera de electroforeză este de 8-10 cm, este necesară o tensiune de 25 V pe centimetru de lungime a membranei, iar intensitatea curentului ar trebui să fie de 0,4-0,5 mA pe centimetru de lățime a membranei. Dacă aceste valori nu sunt atinse sau depășite în timpul electroforezei, concentrația tamponului trebuie crescută sau diluată.
O concentrație de tampon excesiv de scăzută va avea ca rezultat o mișcare rapidă a benzilor și o creștere a lățimii benzii. Pe de altă parte, o concentrație de tampon excesiv de mare va încetini migrarea benzii, făcând dificilă distingerea anumitor benzi de separare.
Trebuie remarcat faptul că în electroforeza membranei cu acetat de celuloză, o parte semnificativă a curentului este condusă prin probă, ceea ce generează o cantitate considerabilă de căldură. Uneori, concentrația de tampon aleasă poate fi considerată adecvată. Cu toate acestea, în condiții de temperatură ambientală crescută sau când se folosește o tensiune mai mare, evaporarea apei din cauza căldurii se poate intensifica, rezultând o concentrație de tampon excesiv de mare și chiar determinând uscarea membranei.
Volumul probei
În electroforeza membranei cu acetat de celuloză, cantitatea de volum al probei este determinată de diverși factori, inclusiv condițiile de electroforeză, proprietățile probei în sine, metodele de colorare și tehnicile de detectare. Ca principiu general, cu cât metoda de detectare este mai sensibilă, cu atât volumul probei poate fi mai mic, ceea ce este avantajos pentru separare. Dacă volumul probei este excesiv, modelele de separare electroforetică pot să nu fie clare, iar colorarea poate, de asemenea, consuma mult timp. Cu toate acestea, atunci când se analizează cantitativ benzile colorate separate folosind metode de detecție colorimetrică de eluție, volumul probei nu trebuie să fie prea mic, deoarece poate duce la valori mai mici de absorbție pentru anumite componente, ceea ce duce la erori mai mari în calcularea conținutului acestora. În astfel de cazuri, volumul probei ar trebui mărit în mod corespunzător.
De obicei, volumul de probă adăugat pe fiecare centimetru al liniei de aplicare a probei variază de la 0,1 la 5 μL, echivalent cu o cantitate de probă de 5 până la 1000 μg. De exemplu, în analiza electroforezei de rutină a proteinelor serice, volumul de probă adăugat pe fiecare centimetru al liniei de aplicare nu depășește, în general, 1 μL, echivalent cu 60 până la 80 μg de proteină. Cu toate acestea, atunci când se analizează lipoproteinele sau glicoproteinele folosind aceeași metodă de electroforeză, volumul probei trebuie să fie mărit corespunzător.
În concluzie, volumul de probă cel mai potrivit ar trebui selectat pe baza unor condiții specifice printr-o serie de experimente preliminare.
Alegerea soluției de colorare
Benzile separate în electroforeza membranei cu acetat de celuloză sunt de obicei colorate înainte de detectare. Diferitele componente ale eșantionului necesită metode de colorare diferite, iar metodele de colorare adecvate pentru electroforeza membranei cu acetat de celuloză pot să nu fie în întregime aplicabile hârtiei de filtru.
Există trei principii majore pentru a alege soluția de coloraremembrana de acetat de celuloza. În primul rând,Coloranții solubili în apă ar trebui să fie preferați în locul coloranților solubili în alcool pentru a evita contracția și deformarea membranei cauzate de soluția de colorare a acesteia din urmă. După colorare, este important să clătiți membrana cu apă și să minimizați durata colorării. În caz contrar, membrana se poate ondula sau se micșorează, ceea ce ar afecta detectarea ulterioară.
În al doilea rând, este de preferat să selectați coloranți cu afinitate puternică de colorare pentru probă. În electroforeza membranei cu acetat de celuloză a proteinelor serice, amino black 10B este utilizat în mod obișnuit datorită afinității sale puternice de colorare pentru diferite componente ale proteinelor serice și a stabilității sale.
În al treilea rând, ar trebui aleși coloranți de calitate fiabile. Unii coloranți, în ciuda faptului că au același nume, pot conține impurități care duc la un fundal deosebit de întunecat după colorare. Acest lucru poate chiar estompa benzile inițial bine separate, făcându-le dificil de distins.
În cele din urmă, alegerea concentrației soluției de colorare este importantă. Teoretic, s-ar putea părea că o concentrație mai mare a soluției de colorare ar duce la o colorare mai aprofundată a componentelor probei și la rezultate de colorare mai bune. Cu toate acestea, acesta nu este cazul. Afinitatea de legare între componentele probei și colorant are o anumită limită, care nu crește odată cu creșterea concentrației soluției de colorare. Dimpotrivă, o concentrație excesiv de mare a soluției de colorare nu numai că irosește colorantul, ci și face dificilă obținerea unui fundal clar. Mai mult, atunci când intensitatea culorii atinge o anumită valoare maximă, curba de absorbție a colorantului nu urmează o relație liniară, mai ales în măsurătorile cantitative. În electroforeza membranei cu acetat de celuloză, concentrația soluției de colorare este în general mai mică decât cea utilizată în electroforeza hârtiei.
Detalii de știut despre Beijing Liuyi Biotechnology's membrana de acetat de celulozarezervorul de electroforeză și aplicația sa de electroforeză, vă rugăm să vizitați aici:
lExperiment pentru separarea proteinelor serice cu membrana de acetat de celuloză
lElectroforeză cu membrană de acetat de celuloză
Dacă aveți vreun plan de achiziție pentru produsele noastre, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați. Ne puteți trimite mesaj pe e-mail[email protected]sau[email protected], sau vă rugăm să ne sunați la +86 15810650221 sau adăugați Whatsapp +86 15810650221 sau Wechat: 15810650221.
Referinţă:Electroforeza (ediția a doua) de domnul Li
Ora postării: 06-jun-2023