Ce este electroforeza pe gel de poliacrilamidă?

Electroforeza pe gel de poliacrilamidă

Electroforeza pe gel este o tehnică fundamentală în laboratoarele din disciplinele biologice, permițând separarea macromoleculelor precum ADN, ARN și proteine. Diferitele medii și mecanisme de separare permit ca subseturile acestor molecule să fie separate mai eficient prin exploatarea caracteristicilor lor fizice. Pentru proteine ​​în special, electroforeza pe gel de poliacrilamidă (PAGE) este adesea tehnica de alegere.

PAGE este o tehnică care separă macromolecule precum proteinele pe baza mobilității lor electroforetice, adică a capacității analiților de a se deplasa către un electrod cu sarcina opusă. În PAGE, aceasta este determinată de sarcina, dimensiunea (greutatea moleculară) și forma moleculei. Analiții se deplasează prin porii formați în gel de poliacrilamidă. Spre deosebire de ADN și ARN, proteinele variază în sarcină în funcție de aminoacizii încorporați, ceea ce poate influența modul în care funcționează. Șirurile de aminoacizi pot forma, de asemenea, structuri secundare care influențează dimensiunea lor aparentă și, în consecință, modul în care sunt capabile să se miște prin pori. Prin urmare, poate fi uneori de dorit să se denaturaze proteinele înainte de electroforeză pentru a le lineariza dacă este necesară o estimare mai precisă a dimensiunii.

PAGINA SDS

Electroforeza pe gel de poliacrilamidă cu sulfat de sodiu-dodecil este o tehnică utilizată pentru separarea moleculelor de proteine ​​cu mase de la 5 la 250 kDa. Proteinele sunt separate numai pe baza greutății lor moleculare. Dodecilsulfatul de sodiu, un surfactant anionic, se adaugă în prepararea gelurilor care maschează sarcinile intrinseci ale probelor de proteine ​​și le conferă un raport sarcină/masă similar. Cu cuvinte simple, denaturează proteinele și le conferă o sarcină negativă.

PAGINA nativa

Native PAGE este o tehnică care utilizează geluri nedenaturate pentru separarea proteinelor. Spre deosebire de SDS PAGE, la prepararea gelurilor nu se adaugă niciun agent denaturant. Ca rezultat, separarea proteinelor are loc pe baza sarcinii și mărimii proteinelor. În această tehnică, conformația, plierea și lanțurile de aminoacizi ale proteinelor sunt factorii de care depinde separarea. Proteinele nu sunt deteriorate în acest proces și pot fi recuperate după finalizarea separării.

Cum funcționează electroforeza pe gel de poliacrilamidă (PAGE)?

Principiul de bază al PAGE este separarea analiților prin trecerea lor prin porii unui gel de poliacrilamidă folosind un curent electric. Pentru a realiza acest lucru, un amestec de acrilamidă-bisacrilamidă este polimerizat (poliacrilamidă) prin adăugarea de persulfat de amoniu (APS). Reacția, care este catalizată de tetrametiletilendiamină (TEMED), formează o structură asemănătoare rețelei cu pori prin care analiții se pot mișca (Figura 2). Cu cât este mai mare procentul de acrilamidă totală inclusă în gel, cu atât dimensiunea porilor este mai mică, prin urmare, proteinele care vor putea trece prin sunt mai mici. Raportul dintre acrilamidă și bisacrilamidă va afecta și dimensiunea porilor, dar aceasta este adesea menținută constantă. Dimensiunile mai mici ale porilor reduc, de asemenea, viteza cu care proteinele mici sunt capabile să se deplaseze prin gel, îmbunătățind rezoluția lor și împiedicându-le să curgă rapid în tampon atunci când este aplicat curentul.

Echipament pentru electroforeza pe gel de poliacrilamida

Celulă de electroforeză cu gel (rezervor/camera)
Rezervorul de gel pentru electroforeza pe gel de poliacrilamidă (PAGE) este diferit de rezervorul de gel de agaroză. Rezervorul de gel de agaroză este orizontal, în timp ce rezervorul PAGE este vertical. Prin celula de electroforeză verticală (rezervor/camera), un gel subțire (în mod normal 1,0 mm sau 1,5 mm) este turnat între două plăci de sticlă și montat astfel încât partea inferioară a gelului să fie scufundată în tampon într-o cameră, iar partea superioară să fie scufundată în tampon. într-o altă cameră. Când se aplică curent, o cantitate mică de tampon migrează prin gel din camera superioară în camera inferioară. Cu cleme puternice pentru a garanta menținerea ansamblului într-o poziție verticală, echipamentul facilitează rularea rapidă a gelului, cu o răcire uniformă, rezultând benzi distincte.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) produce o gamă de dimensiuni de celule de electroforeză cu gel de poliacrilamidă (rezervoare/camere). Modelele DYCZ-20C și DYCZ-20G sunt celule verticale de electroforeză (rezervoare/camere) pentru analiza secvențierii ADN. Unele dintre celulele de electroforeză verticală (rezervoare/camere) sunt compatibile cu sistemul de blotting, cum ar fi modelele DYCZ-24DN, DYCZ-25D și DYCZ-25E sunt compatibile cu sistemul Western Blotting modelul DYCZ-40D, DYCZ-40G și DYCZ-40F, care sunt folosite pentru transferul moleculei proteice din gel pe membrană. După electroforeza SDS-PAGE, Western Blotting este o tehnică de detectare a unei proteine ​​specifice într-un amestec de proteine. Puteți alege aceste sisteme de blotting în funcție de cerințele experimentale.

Alimentare cu electroforeza
Pentru a furniza energie electrică pentru rularea gelului, veți avea nevoie de o sursă de alimentare pentru electroforeză. La Liuyi Biotechnology oferim o gamă de surse de electroforeză pentru toate aplicațiile. Modelele DYY-12 și DYY-12C cu tensiune și curent stabil ridicat pot îndeplini electroforeza cerințelor de înaltă tensiune. Are funcția de stand, cronometrare, VH și aplicare pas cu pas. Sunt ideale pentru aplicarea electroforezei de secvențiere IEF și ADN. Pentru aplicarea generală a proteinelor și a electroforezei ADN, avem modelul DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 și așa mai departe, care sunt, de asemenea, surse de alimentare la cald cu celule de electroforeză (rezervoare/camere). Acestea pot fi utilizate pentru aplicații de electroforeză de medie și joasă tensiune, cum ar fi pentru utilizarea în laboratorul școlar, laboratorul spitalicesc și așa mai departe. Mai multe modele pentru surse de alimentare, vă rugăm să vizitați site-ul nostru.

Marca Liuyi are o istorie de peste 50 de ani în China, iar compania poate oferi produse stabile și de înaltă calitate în întreaga lume. De-a lungul anilor de dezvoltare, este demn de alegerea ta!

Pentru mai multe informații despre noi, vă rugăm să ne contactați pe e-mail[email protected] or [email protected].

Referințe pentru Ce este electroforeza pe gel de poliacrilamidă?
1. Karen Steward PhD Electroforeza pe gel de poliacrilamidă, cum funcționează, variantele de tehnică și aplicațiile sale