Testul Comet (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) este o tehnică sensibilă și rapidă utilizată în principal pentru a detecta deteriorarea ADN-ului și repararea în celule individuale. Numele „Comet Assay” provine de la forma caracteristică asemănătoare cometei care apare în rezultate: nucleul celulei formează „capul”, în timp ce fragmentele de ADN deteriorate migrează, creând o „coadă” asemănătoare unei comete.
Principiu
Principiul testului Comet se bazează pe migrarea fragmentelor de ADN într-un câmp electric. ADN-ul intact rămâne în nucleul celulei, în timp ce ADN-ul deteriorat sau fragmentat migrează către anod, formând „coada” cometei. Lungimea și intensitatea cozii sunt direct proporționale cu gradul de deteriorare a ADN-ului.
Procedură
- Pregătirea celulelor: Celulele care urmează a fi testate sunt amestecate cu agaroză cu punct de topire scăzut și răspândite pe lamele de microscop pentru a forma un strat uniform.
- Liza celulară: Lamelele sunt scufundate într-o soluție de liză pentru a îndepărta membrana celulară și membrana nucleară, expunând ADN-ul.
- Electroforeză: Lamelele sunt plasate într-o cameră de electroforeză în condiții alcaline sau neutre. Fragmentele de ADN deteriorate migrează către electrodul pozitiv sub influența câmpului electric.
- Colorarea: După electroforeză, lamelele sunt colorate cu un colorant fluorescent (de exemplu, bromură de etidio) pentru a vizualiza ADN-ul.
- Analiza microscopică: Folosind un microscop cu fluorescență sau un software specializat, formele cometei sunt analizate și sunt măsurați parametri precum lungimea cozii și intensitatea.
Imagine din biorender
Analiza datelor
Rezultatele testului Comet sunt evaluate pe baza mai multor parametri cheie:
- Lungimea cozii: Reprezintă distanța pe care ADN-ul migrează, indicând amploarea deteriorării ADN-ului.
- Conținutul de ADN din coadă: Procentul de ADN care migrează în coadă, adesea folosit ca măsură cantitativă a deteriorarii ADN-ului.
- Olive Tail Moment (OTM): Combină atât lungimea cozii, cât și conținutul de ADN al cozii pentru a oferi o măsură mai cuprinzătoare a daunelor ADN-ului.
Aplicații
- Studii de genotoxicitate: Testul Comet este utilizat pe scară largă pentru a evalua efectele substanțelor chimice, medicamentelor și radiațiilor asupra ADN-ului celular, ceea ce îl face un instrument cheie pentru testarea genotoxicității.
- Toxicologia mediului: Ajută la analiza impactului poluanților de mediu asupra ADN-ului organismelor, oferind informații despre siguranța ecosistemului.
- Cercetare medicală și clinică: Testul Comet este utilizat în studierea mecanismelor de reparare a ADN-ului, a cancerului și a altor boli legate de ADN. De asemenea, evaluează impactul terapiilor pentru cancer precum radioterapia și chimioterapia asupra ADN-ului.
- Științe Alimentare și Agricultură: Folosit pentru a evalua siguranța pesticidelor, aditivilor alimentari și a altor substanțe și pentru a studia efectele toxice ale acestora pe modele animale.
Avantaje
- Sensibilitate ridicată: Capabil să detecteze niveluri scăzute de deteriorare a ADN-ului.
- Operare simplă: Tehnica este simplă, ceea ce o face potrivită pentru screening-ul de mare capacitate.
- Aplicație largă: Poate fi aplicat pe diferite tipuri de celule, inclusiv celule animale și vegetale.
- Provocări de cuantificare: În timp ce furnizează date calitative despre deteriorarea ADN-ului, analiza cantitativă se bazează în mare măsură pe software și tehnici de analiză a imaginilor.
- Condiții experimentale: Rezultatele pot fi influențate de factori precum timpul de electroforeză și pH-ul, care necesită un control atent al condițiilor experimentale.
Limitări
Testul Comet este un instrument de neprețuit în cercetarea biomedicală, știința mediului și dezvoltarea medicamentelor datorită flexibilității și sensibilității sale ridicate în detectarea deteriorării și repararea ADN-ului. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotehnologie)oferă cameră de electroforeză orizontală pentru testarea cometei. Bine ați venit să contactați cu noi pentru a discuta despreTestul cometeiprotocol.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) s-a specializat în producția de instrumente de electroforeză de mai bine de 50 de ani, cu propria noastră echipă tehnică profesionistă și centru de cercetare și dezvoltare. Avem o linie de producție fiabilă și completă, de la proiectare la inspecție și depozit, precum și suport de marketing. Produsele noastre principale sunt celula de electroforeză (rezervor/camera), sursa de alimentare cu electroforeză, transiluminator cu LED albastru, transiluminator UV, sistem de analiză și imagine cu gel etc. De asemenea, furnizăm instrumente de laborator cum ar fi instrumentul PCR, mixerul vortex și centrifuga pentru laborator.
Dacă aveți vreun plan de achiziție pentru produsele noastre, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați. Ne puteți trimite mesaj pe e-mail[email protected]sau[email protected], sau vă rugăm să ne sunați la +86 15810650221 sau adăugați Whatsapp +86 15810650221 sau Wechat: 15810650221.
Vă rugăm să scanați codul QR pentru a-l adăuga pe Whatsapp sau WeChat.
Ora postării: 20-sept-2024